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          ACK紅細胞裂解液的原理及使用
        2. 發布日期:2024-05-14      瀏覽次數:206
          • 原理:氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質,氨根離子不能通過細胞膜,而其他離子可以通過,造成細胞內外的離子濃度差異,形成了滲透壓差,外部的水分會擴散至細胞內,使紅細胞膨脹,達到裂解的效果。


            使用說明:
            組織細胞樣品:
            1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液;
            2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液),輕輕吹打混勻;
            3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
            4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
            5.如裂解不好可重復步驟2和3;
            6.重懸細胞,用于后續實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進行。


            血細胞:
            1.新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
            2.取出4℃冰箱預冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液),輕輕吹打混勻;
            3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液;
            4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養液離心洗2-3次;
            5.如裂解不可重復步驟2和3;
            6.重懸細胞,用于后續實驗;如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行。


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